A medida que el CP penetra en el embrión, éste se expande gradualmente a causa de una re-entrada de agua para el mantenimiento del equilibrio osmótico. El momento en que se produce esta re-expansión refleja:
- La especie del embrión.
- El estadio de desarrollo embrionario.
- El ratio superficie/volumen del embrión.
- El crioprotector utilizado.
- La temperatura de exposición.
Dentro de los sistemas de equilibrio (inicialmente diseñados para la congelación de embriones in vivo), la técnica más utilizada en el caso de los EPIV es la congelación en EG 1,5M en presencia de sacarosa. El equilibrio se alcanza a -7ºC (Tª de seeding) para después, realizar un descenso de la temperatura hasta los -32ºC a una velocidad de 0,3ºC/min.
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