Estadísticas de los embriones transferidos

En el ámbito del ganado vacuno, y en el marco de la UE, las estadísticas correspondientes al año 1999 muestran que un 58% de los embriones transferidos estaban congelados (in vivo e in vitro), lo que da idea de la importancia del desarrollo de estas técnicas (1).

• La criopreservación y el almacenamiento de embriones a bajas temperaturas (Nitrógeno líquido-NL-) presenta numerosas ventajas, tanto desde el punto de vista biológico como desde el comercial:

• Permite una reducción de costes derivados de la aplicación de las tecnologías reproductivas.

• Facilita una disociación de todas estas técnicas de la actividad reproductiva cíclica que presentan las especies mamíferas de interés, consiguiéndose una independencia temporal del estado fisiológico de los animales (hembras receptoras, por ejemplo).

• Limita la deriva genética.

• Elimina las patologías que normalmente se asocian al mantenimiento de animales vivos.

La criopreservación

La criopreservación de los embriones supone el ralentizamiento de su metabolismo hasta un punto próximo a su detención, con el fin de sincronizar acontecimientos posteriores, o de modificar la ciclicidad reproductiva, y es una técnica ampliamente usada como complemento de los procesos de reproducción asistida.

Ricardo Fernandez Barrueco

Producción de embriones in vitro (EPIV)

La producción de embriones in vitro (EPIV) a partir de ovocitos obtenidos de vacas de alto mérito es una herramienta que ofrece nuevas perspectivas para la aceleración del progreso genético. Esta técnica se practica con ritmos de recogida intensivos (2 veces/semana durante 2 meses consecutivos) sobre hembras gestantes o vacías, e independientemente de su normalidad reproductiva. Asimismo, la FIV representa un medio para la producción de embriones a bajo precio a partir de ovarios de matadero. La utilización de las bajas temperaturas para conservar los embriones producidos por esta tecnología se ha convertido en una herramienta indispensable que permitirá consolidar y aumentar el impacto de estas tecnologías.

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Éxitos en tecnológica In Vitro

Los primeros éxitos en la puesta a punto de la técnica de la fecundación in vitro (FIV), en un principio a partir de ovocitos madurados in vivo y obtenidos por lavado de los oviductos tras el sacrificio del animal, posteriormente con la utilización de ovocitos recuperados a partir de ovarios procedentes de matadero.

Por último, el desarrollo de un sistema que permite la obtención de ovocitos a partir de hembras vivas, conocido con el nombre de Ovum Pick-Up (OPU).

Tecnología in vitro Vacunos

Las posibilidades de aplicación de la tecnología in vitro son múltiples y presentan un elevado interés en el caso del ganado bovino. La tecnología reproductiva in vitro se encuentra actualmente en un estado de desarrollo avanzado.

El actual grado de desarrollo de la tecnología reproductiva in vitro ha sido posible gracias a tres hechos fundamentales:

La definición de medios sintéticos cada vez más adaptados a los requerimientos específicos para que el embrión bovino vea satisfechas sus necesidades metabólicas durante las primeras fases de su desarrollo.

RICARDO FERNANDEZ BARRUECO

RICARDO FERNANDEZ BARRUECO

TESTS DE FUNCIONALIDAD ESPERMÁTICA BASADOS EN LA FIV

Se han diseñado numerosos tests para evaluar in vitro la funcionalidad de los espermatozoides, especialmente de dosis congeladas, en relación a su capacidad para interaccionar con el ovocito. Estos tests evalúan las distintas fases del proceso de fecundación, como la capacidad espermática de reconocimiento y unión a la zona pelúcida (ZP), la penetración de ovocitos homólogos o heterólogos (libres de zona pelúcida), o la inducción del desarrollo embrionario.

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RICARDO FERNANDEZ BARRUECO

Ricardo Fernández Barrueco

TESTS DE UNIÓN A LA ZONA PELÚCIDA:

Este test se diseñó con el objetivo de cuantificar el número de espermatozoides capacitados que son capaces de unirse selectivamente ala zona pelúcida de ovocitos homólogos.

Los resultados de este test, en la especie humana, son altamente predictivos del resultado de la FIV . En algunas especies domésticas se ha intentado establecer una correlación entre los resultados del test de unión a la zona y la fertilidad in vivo del semen.

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RICARDO FERNANDEZ BARRUECO

RICARDO FERNANDEZ BARRUECO

TESTS DE PENETRACIÓN DE OVOCITOS DE HÁMSTER LIBRES DE ZONA PELÚCIDA:

Este test, desarrollado por Yanagimachi y Rogers (1976), permite valorar la capacidad de los espermatozoides para penetrar un ovocito de hámster libre de zona pelúcida. Se utiliza fundamentalmente en la especie humana para valorar la fertilidad espermática, debido a las restricciones legales o éticas que existen en algunos paí- ses para el uso de ovocitos humanos. Este test se ha desarrollado con éxito en la especie bovina (Brackett et al., 1982) pero su aplicación es muy escasa, puesto que es más sencillo obtener ovocitos bovinos a partir de ovarios de matadero que obtener ovocitos de hámster para luego extraerles la zona pelúcida.

RICARDO FERNANDEZ BARRUECO

RICARDO FERNANDEZ BARRUECO

TESTS DE FIV:

La fecundación in vitro de ovocitos homólogos es, sin lugar a dudas, el test más completo para evaluar la funcionalidad espermática, ya que permite valorar todas las fases del proceso de fecundación, desde el estado de capacitación espermática hasta la fusión con la membrana vitelina del ovocito o el inicio del desarrollo embrionario (Lonergan, 1994; Shamsuddin et al., 1996; Ward et al., 2002). Aunque en algunos estudios se ha encontrado una elevada correlación con la fertilidad in vivo de los toros (Hillery et al., 1990; Marquant-Le Guienne et al., 1990; Zhang et al., 1997; Ward et al., 2003), todavía se necesita una mayor estandarización de los métodos a la hora de aplicar dicha técnica, puesto que existe considerable variabilidad entre los resultados de FIV obtenidos para un mismo toro, debido a factores de variación como por ejemplo el método de selección de los espermatozoides (percoll o swim-up) (Parrish et al., 1995), de capacitación espermática in vitro (Saeki et al., 1995) o el número de espermatozoides utilizado para la inseminación de los ovocitos 

RICARDO FERNANDEZ BARRUECO

Ricardo Fernandez Barrueco

TÉCNICAS ACTUALES DE CONGELACIÓN DE EMBRIONES IN VITRO

Congelación tradicional (métodos de equilibrio)

Los crioprotectores (CP) utilizados en estos métodos son normalmente permeables. Los más frecuentemente utilizados son: glicerol y etilenglicol.

Durante la fase inicial de preenfriamiento, los embriones se exponen a la presencia del crioprotector en una fase que denominamos de equilibración. La respuesta inmediata del embrión ante la presencia de un CP permeable es una rápida disminución de volumen por pérdida del agua intracelular, hasta que se alcanza el equilibrio. Este fenómeno se debe a la hiperosmolaridad inicial de la solucion extracelular y a que los embriones son mucho más permeables al agua que a los crioprotectores; la contracción se detiene cuando se alcanza el equilibrio entre la salida de agua y la entrada del CP. A medida que el CP penetra en el embrión, éste se expande gradualmente a causa de una re-entrada de agua para el mantenimiento del equilibrio osmótico. El momento en que se produce esta re-expansión refleja:

• La especie del embrión.
  
  
• El estadio de desarrollo embrionario.
  
  
• El ratio superficie/volumen del embrión.
  
  
• El crioprotector utilizado.
  
  
• La temperatura de exposición.
  
  
  
  
  
  

  

  Ricardo Fernández Barrueco

  
  
  
  
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